您的位置 > 首页 > 生殖医学中心 > 教学科研 > 正文

生殖医学中心----张顺课题和论文

发布者:生殖医学中心 发布时间:2015-04-03 阅读:3078

生殖医学中心科研项目-张顺 

主持科研项目

题目:精子介导转基因过程中外源基因整合机制的研究

来源:国家自然科学基金地区基金项目

编号:31460282

经费50.0万元

年限2015.01-2018.12

摘要:

(无)

文章

1Shun Zhang, Jin-Yue Shi, Xiao-Mei Guan, Jin-Ji Yang, Ying-Ming Wei, Qing-You Liua, De-Shun Shi*, Feng-Hua Lu. Factors Affecting the Efficiency of Introducing Foreign DNA into Rabbit Zygotes by Cytoplasmic

 Injection [J] journal of animal and veterinary advances.12(8)897-903.2013.SCI

 

Cytoplasmic injection of exogenous DNA was a high potential methodology that would tremendously increase 

the efficiency of transgene. In the present study, researchers take a new look at the ancient method and 

investigate the influencing factors on embryonic development and transgenic efficiency following cytoplasmic 

injection using pEGFP-N1 plasmid. In the first experiment, researchers evaluated embryonic development and EGFP expression in 

embryos produced by cytoplasmic injection with different concentrations of pEGFP-N1 plasmid (30, 45, 60 and 75 ng μL-1) and found that the concentration of 60 ng μL-1 was optimal for increasing in both blastocysts rate and EGFP-positive blastocysts rate. In the second experiment, the embryonic development and EGFP expression after 

cytoplasmic injection with different volumes (40, 50 and 60 pL) of exogenous DNA was investigated, the 

result showed that the optimal volume of injected was 40 pL with which approximately 54.5% of the 

blastocysts rate and 59.3% of the blastocysts expression EGFP were obtained. Finally, in order to find 

out the most appropriate timing for cytoplasmic injection, three time periods (16, 18 and 20 h) were assayed

 to

 harvest the zygotes. After being injected and cultured, the result confirmed that 16 h group (68.6%) had a

 significant differences compare to 18 h group (44.9%) and 20 h group (9.7%) at EGFP-positive blastocyst rate but there was no significant differences as to blastocyst rate among these three groups. 

Two pups were given birth after embryo transplantation. The integration of the foreign DNA was confirmed

 by PCR and an expected 720 bp products showed that both of the two pup’s tissues including kidneys and 

livers carry EGFP gene. The results of frozen tissue sections analyzed by confocal laser scanning microscope 

and western blot also were confirmed that EGFP expression in kidney and liver. In conclusion, the results of 

this study imply that the method of cytoplasmic injection at one-cell stage is feasible for producing transgenic animals which can significantly improve the transgenic efficiency.

 

2Shun Zhang , Fenghua Lu, Qingyou Liu, Yubing Liu, Xiaomei Guan, Yingming Wei , Shijian Tan and Deshun Shi*Efficient generation of sFat-1 transgenic rabbits with rich in n-3 polyunsaturated fatty acids by intracytoplasmic sperm injection[J]. Reprod Fertil Dev. 2014 Jul 16. doi: 10.1071/RD13413. [Epub ahead of print] (SCI

 

N-3 polyunsaturated fatty acids (n-3 PUFAs) have their first double bond at the third carbon from the methyl end of the fatty-acid chain and had been proven to be beneficial to human health. However, mammals cannot produce n-3 PUFAs by themselves because they lack the n-3 fatty-acid desaturase (Fat-1) gene. Thus, the possibility of producing sFat-1 transgenic rabbits was explored in this study. The transgenic cassette of pPGK1–sFat-1–CMV–EGFP was constructed and transgenic rabbit embryos were produced by intracytoplasmic sperm injection

 (ICSI). When 123 EGFP-positive embryos at the 2–8-cell stage were transplanted into the oviduct of four oestrous-synchronised recipients, two of them became pregnant and gave birth to seven pups. However, transfer of 

embryos into the uterus of oestrous-synchronised recipients and oviduct or uterus of oocyte donor rabbits did not result in pregnancy. The 

integration of the sFat-1 gene was confirmed in six of the seven live pups by PCR and Southern blot. The expression of the sFat-1 gene in the six transgenic pups was also detected by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Gas chromatography–mass spectrometry analysis revealed that transgenic rabbits exhibited an ~15-fold decrease in the ratio of n-6 : n-3 PUFAs in muscle compared with wild-type rabbits and non-transgenic rabbits. These results demonstrate that sFat-1 transgenic rabbits can be produced by ICSI and display a low ratio of n-6 : n-3 PUFAs.

 

3)黎江张顺管晓梅, 敖秋桅, 石金月, 刘荣立, 杨金姬, 向舒, 陆凤花, 韦英明, 石德顺*. 兔胚胎移植影响因素研究[J].南方农业学报. 448:1390-1393.2013(中文核心)

 

【目的】探讨分析兔胚胎移植的影响因素,为提高兔胚胎移植效率及生产转基因兔奠定基础。【方法】采集获得的交配胚胎经体外培养后,按单只受体移植胚胎数、受体类型(经产母兔与青年母兔)、受体同期发情方式随机分组,对比观察胚胎移植后受体母兔的妊娠情况。【结果】单只受体兔每次移植10~20枚和20~30枚胚胎获得的妊娠率分别为23.1%20.0%,二者差异不显著(P>0.05);采用经产母兔为受体可获得显著高于青年母兔的妊娠率(27.8%vs 13.3%,P<0.05);以自然同期发情为受体母兔胚胎移植后获得的妊娠率显著高于诱导同期发情的受体母兔(30.7%vs 10.0%,P<0.05)。【结论】兔胚胎移植时选择自然发情的经产母兔作为受体能获得较好的胚胎移植效果,单只受体移植胚胎数以控制在10~30枚为宜。